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糖蛋白染色试剂盒
 产品货号: RTD6501
 产品名称: 糖蛋白染色试剂盒
 产品价格/规格: 10次 1000元
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 更新时间: 2019-10-18
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    产品编号

    规格

    运输

    RTD6501

    10

    RT

    产品简介:                                                

    本产品用于PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上糖蛋白的检测。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色。该试剂盒检测的灵敏度一般可以达到微克级别,但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关,可以用于 SDS-PAGE 和2D电泳的凝胶检测,也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测(但背景较高),还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

    按照每次使用25 ml糖蛋白染色试剂计算,本产品可以染色 8-10块mini-PAGE(8×10cm)胶或印迹膜。

    产品组成:

    产品编号

    产品名称

    规格

    贮存

    运输

    RTD6501-1

    氧化试剂

    2.5 g

    常温避光

    RT

    RTD6501-2

    糖蛋白染色试剂

    250 ml

    常温避光

    RT

    RTD6501-3

    还原试剂

    1.25 g

    常温避光

    RT

    RTD6501-4

    阳性对照(辣根过氧化物酶)

    1 mg

    -20

    RT

    RTD6501-5

    阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)

    1 mg

    -20

    RT

    PL080

    5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液

    1 ml

    -20

    RT

    -

    250ml棕色塑料瓶

    2

    -

    -

    -

    说明书

    1

    -

    -

    储存条件

    按照标签温度贮存,常温运输。开封后一年有效。

    ●实验前准备:

    1. 配制 3%醋酸溶液:将 15 ml 自备的冰醋酸与 485 ml 超纯水混匀,常温保存备用。

    2. 配制 50%甲醇溶液:将 250 ml 甲醇与 250 ml 超纯水混匀,常温保存备用。

    3. 配制氧化试剂溶液: 将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250ml空塑料瓶中, 然后加入250 ml的超纯水,充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,常温保存备用。

    4. 配制还原试剂溶液: 将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的 250ml 空塑料瓶中,然后加入 250 ml的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,常温保存备用。

    5. 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液:取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液,加入1.6 ml超纯水,-20℃贮存备用。

    6. 配制阳性对照(辣根过氧化物酶)溶液:向装有 1 mg 辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上样缓冲液,所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即为 1mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用, 其余的放-20℃长期保存。 对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。

    7. 配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)溶液:向装有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上样缓冲液(自备),所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用,其余的放-20℃长期保存。对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。

    8. 样品稀释:用 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为 1 mg/ml,SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为 1×。对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 5-10 μl 的样品即可,上样前95℃处理5分钟。。

    凝胶染色的操作步骤(膜染色从步骤3开始):

    注意事项:

    1.以下步骤仅针对0.75mm厚度大小8×10cm的凝胶,1-1.5mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间。

    2. 请在通风橱中进行以下操作。

    . 固定:

    取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶,在50 ml 50%甲醇溶液中,摇床慢摇30分钟,弃甲醇溶液。

    . 漂洗:

    50 ml超纯水洗涤凝胶两次,每次摇床慢摇10分钟,弃超纯水。

    . 氧化:

    凝胶中加入 25 ml 氧化试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。

    . 漂洗:

    50 ml超纯水洗涤凝胶3次,每次摇床慢摇5分钟,弃溶液。

    . 染色:

    凝胶中加入25 ml糖蛋白染色试剂,摇床慢摇15 分钟,糖蛋白会在5-10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低,适当延长显色时间。弃染色溶液。

    注:若糖蛋白染色试剂中有晶体析出,只需取上清液即可,不要加热溶解晶体。

    染色步骤会产生有刺激性气味气体,请在通风橱中操作。

    . 还原:

    凝胶中加入 25 ml 还原试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。此时凝胶背景略带红色。

    . 漂洗:

    加入50 ml 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次,每次10分钟,直至胶背景红色变浅,接近淡红色或无色,此时红色糖蛋白主带清晰可见。

    . 保存:

    胶块保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

    实验记录表格

    实验日期:

    编号

    步骤

    体积

    时间

     

     

    凝胶尺寸 8×10 cm

    0.75mm胶或膜

    1

    固定

    50 ml

    30 min

    膜从步骤3开始

    2

    漂洗

    2×50 ml

    2×10 min

    3

    氧化

    25 ml

    15 min

    4

    漂洗

    3×50 ml

    3×5 min

    5

    染色

    25 ml

    15 min或更长

    条带变为品红色

    6

    还原

    25 ml

    5 min

    7

    漂洗

    3×50 ml

    3×10 min

    漂洗后凝胶背景变浅

    8

    保存

    50 ml

    -

    实验示例:




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