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氨苄青霉素溶液(100mg/ml)

氨苄青霉素溶液(100mg/ml)

产品编号:AA0120S-02

产品规格:10×1ml

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价格 ¥150

氨苄青霉素溶液(100 mg/ml)

产品包装:

产品编号

产品名称

产品包装

说明书

AA0120S-02

氨苄青霉素溶液(100mg/ml)

10×1 ml

1

产品简介:

氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)又称安比西林、氨苄西林,是一种β-内酰胺类抗生素,干扰肽聚糖的交联从而抑制细菌细胞壁的合成。氨苄青霉素时常被用于分子生物学实验研究中,如用于配制含氨苄青霉素的LB培养基或LB平板等。氨苄青霉素溶液已经0.22 μm过滤除菌,可以直接添加到培养基中。一般推荐工作浓度为50~100 μg/ml。

本氨苄青霉素溶液已经优化溶解液,可以保持溶液在-20℃下基本不结冰,方便使用的同时降低了反复冻融对抗性的影响。

贮存、效期及运输:

-20℃保存;有效期6个月;湿冰运输。

使用方法:

1. 取出-20℃保存的氨苄青霉素溶液,常温彻底溶化,完全混匀。

注:溶液在-20℃下基本为流动性溶液,如有冰晶形成,常温彻底溶化后使用。

2.一般Amp在LB中终浓度为50~100 μg/ml。可以大体按照1/1000 LB体积加入100 mg/ml Amp溶液,如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。

注:氨苄青霉素对高温敏感,要等待LB琼脂温度低于55℃后再加入氨苄溶液。

  3. 在所有的细菌筛选抗生素中,氨苄青霉素的稳定性最为不佳,参照下表确定使用的效期:

类型

贮存温度

抗性维持时间

备注

LB氨苄平板

4-8

2

平板要Parafilm封口,避免平板水分蒸发干裂

氨苄溶液(100mg/ml

-20

6个月

尽量降低溶液反复冻融次数

氨苄溶液(100mg/ml

4-8

2

尽量避免溶液贮存在4-8

LB液体摇菌

37℃培养

2

摇菌时,OD值控制在3以内

注意事项:

1. 卫星菌落:LB氨苄琼脂平板培养时间过长时,会发现一个大菌落的周围会出现一些小的菌落,这些小的菌落称为卫星菌落(satellite colony)。原因:氨苄青霉素可以被β-内酰胺酶(β-lactamase)水解。平板上的细菌产生的β-内酰胺酶分泌到细胞外,随着细菌的生长,培养基中的β-内酰胺酶会不断增加,这时培养基内氨苄青霉素会被降解,因此没有氨苄抗性质粒的小菌群则环绕大菌落生长,产生卫星菌落。卫星菌落没有氨苄抗性,挑取单菌落时,不要挑取卫星菌落培养。

2. 质粒丢失:氨苄抗性细菌在传代的时候,会出现质粒丢失,传代次数越多,质粒丢失的可能性越大。对于其他抗生素如氯霉素,细菌如果丢失了部分带抗性的质粒,该菌在含有氯霉素的培养基中是不会生长的。但是对于氨苄则不然,在液体培养液中,培养时间过长的培养基中氨苄的浓度会降低,丢失了一部分质粒的细菌也可以在其中生长。因此对于使用氨苄作为抗性标记的克隆,每隔一段时间需要检查细菌质粒丢失情况。比较直观的办法就是通过SDS-PAGE,如果发现蛋白质的表达水平降低了,很大可能是因为质粒丢失了,此时需要重新转化重组载体。

3. 不要使用配制时间过长或超过效期的氨苄溶液。氨苄存储时间过长或者保存不当,很有可能发生降解。

4. 液体培养建议:在液体培养中,不要让细菌长到过饱和,在LB培养基中,OD600绝对不能超过3。如果是扩大培养,可以先把初始培养液内细菌沉淀,然后利用新鲜的培养液重悬,再进行下一步的培养,这样可以大大减少β-内酰胺酶在液体中的含量。


 
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