Picogreen双链 DNA（dsDNA）定量试剂

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent

Ver750452-1.0

●  产品规格：

● 简介：

Picogreen 是一种极为灵敏的荧光核酸染料，其仅在与DNA 双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与 DNA 浓度呈正比，因而可用于精确测量多个来源的 dsDNA，包括基因组 DNA、病毒 DNA、PCR 扩增产物、测序文库等。本产品定量具有以下优势：1. 灵敏度高：可检测低至200 pg的dsDNA，节省宝贵样品；2. 特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；3. 耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。4. 易于使用-只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。5. 适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

●  贮存、效期及运输：

-20℃避光保存；有效期2年；湿冰运输。

●  使用方法：

注：本方法参照 2010《中国药典》进行操作。

1．染料工作液的配置：

PicoGreen dsDNA 定量试剂取出后平衡至常温，该试剂是以 0.1 ml 200×的浓缩液形式保存于DMSO中的。实验当天，根据实验用量用 1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按 1:200 的比例稀释 PicoGreen 浓缩液。注意事项：

1.1 由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。

1.2  PicoGreen试剂见光易分解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。

1.3 溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

2．标准品工作液的配制：

取λ DNA 标准品（货号：RTL6101），用无菌 TE buffer 配制成100 μg/ml 的标准品工作液。

注：标准品也可用其他已知浓度的纯化 DNA；有一些产品描述可使用小牛胸腺 DNA 作为标准品，按照我们实际操作经验，并不推荐它作为标准品。

3．标准品工作液稀释：

3.1 母液稀释：使用 TE 缓冲液将 100 μg/ml 的标准品稀释为 2 μg/ml。

3.2 梯度稀释：参照下表，对DNA 标品母液进行梯度稀释。

3.3 标准曲线的制备：

向经稀释的各梯度标准品溶液中加入1000 μl 染料工作液混匀，避光常温孵育5 min。使用酶标仪或荧光计检测荧光强度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；将溶液加入比色皿或取200 μl加入微孔板，确信不要在样品中引入气泡；以 1×TE 缓冲液空白对照，测定标准品荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。

3.4 测量剩余样品的荧光值：荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生 DNA 浓度的标准曲线。