2×GC Buffer
● 产品组成：
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目录号
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规格
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价格
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RTB3101-01
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1ml
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50元
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RTB3101-03
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10×1ml
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300元
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● 保存：-20℃
● 用途：
PCR 扩增复杂结构的 DNA 片段。
● 产品说明和注意事项：
1. 本产品能与各种PCR酶配合使用，能够扩增具有复杂二级结构模板（GC rich、重复序列等）的PCR片段。
2. 使用 GC Buffer 进行 PCR 扩增时，建议使用 Tm 值较高的引物。因此，引物最好设计在 30 mer 左右。
3. 使用 GC Buffer扩增的 GC rich 的DNA 片段长度，会因 GC 含量不同而各有差异。
4. 由于 GC Buffer 和一般的PCR Buffer 相比 DNA 变性效果较强，因此，一般的 DNA片段（GC含量低于50%的目的片段）不推荐使用2×GC buffer进行扩增。
● 使用说明：
1.
按照下表在0.2ml
PCR管中制备反应体系：
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成分
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25μl反应体系
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50μl反应体系
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终浓度
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Template
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0.05-0.5 μg
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0.1-1 μg
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as you wish
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Primer 1（10
μM）
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0.5 μl
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1 μl
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200nM
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Primer 2（10
μM）
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0.5 μl
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1 μl
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200nM
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2×GC buffer
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12.5 μl
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25 μl
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1×
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dNTP Mixture(10 mM)
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0.5 μl
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1 μl
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200μM each
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Taq (5 U/μl)
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0.25-0.5 μl
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0.5-1 μl
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2.5-5U
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ddH2O
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up to 25 μl
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up to 50 μl
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-
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2. 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4. PCR仪上执行以下程序：
两步法：
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步骤
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温度
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时间
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循环数
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初始变性
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94℃
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5 min
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1
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变性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火和延伸
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68℃
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1 min/kb
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最后延伸
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72℃
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5 min
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1
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*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。
1. 怎样确定扩增片段的GC含量大小？
推荐使用Oligo软件分析片段的GC含量(如下图所示)。
2.
2×GC
buffer能扩增正常GC含量片段吗？
2×GC
buffer可以扩增GC含量正常的模板。然而，由于GC
buffer有比较强的变性效果，因此一般的模板使用GC buffer扩增时，有时会降低扩增效率。
3.
2×GC
buffer能兼容大多数PCR用酶吗？
2×GC
buffer能兼容大多数PCR酶，比如Taq，Taq
plus，Long Taq等，可以根据片段长度以及保真性要求选择不同的酶。
4. 使用GC
buffer扩增时，为什么推荐使用两步法？
由于目的片段GC含量高，引物的Tm值往往会比较高，在PCR时，当退火温度和延伸温度差距较小时，比如退火温度超过60℃时，退火温度和延伸温度可以设成同一数值，一般为68℃。
2×GC buffer
lane 1-5: Rice 390bp fragement(GC% 77.1%)
lane 6-10: Rice 760bp fragement(GC% 72.9%)
lane 1 and 6: TaKaRa 2×GC buffer I
lane 2 and 7: TaKaRa 2×GC buffer II
lane 3 and 8: RTB3101 2×GC buffer
lane 4 and 9: RTB3106 10×Taq PCR buffer
lane 5: Rice 390bp，RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增
lane 10: Rice 760bp，RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增
