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RealPAGE plus彩色凝胶快速制备试剂盒 8%

RealPAGE plus彩色凝胶快速制备试剂盒 8%

产品编号:RTD6132-08

产品规格:8%

相关规格:
数量
价格 ¥300

RealPAGE plus彩色凝胶快速制备试剂盒

 RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit

●  货品规格:

货号

说明

制胶数量

RTD6132-06

制备6%PAGE

125 0.75mm

901 mm

601.5 mm

RTD6132-08

制备8%PAGE

RTD6132-10

制备10%PAGE

RTD6132-12

制备12%PAGE

RTD6132-15

制备15%PAGE

●  货品内容:

组份

货号

名称

规格

保存

1

RTD6132-UA

上层胶溶液A

80 ml

4

2

RTD6132-UB

彩色上层胶溶液B

80 ml

4

3

RTD6132-LA06

下层胶溶液A 6%

250 ml

4

RTD6132-LA08

下层胶溶液A 8%

250 ml

4

RTD6132-LA10

下层胶溶液A 10%

250 ml

4

RTD6132-LA12

下层胶溶液A 12%

250 ml

4

RTD6132-LA15

下层胶溶液A 15%

250 ml

4

4

RTD6132-LB

下层胶溶液B

250 ml

4

5

RTD6132-SP

改良型促凝剂

8 ml

4℃,配制后-20℃贮存

说明书

一份

● 产品简介:

该产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理,采用合理设计的预混合配方和配制流程,可在50分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶,用于变性和非变性蛋白凝胶电泳。本产品可以配制常用分离胶浓度6%、8%、10%、12%和15%,可以满足绝大多数蛋白电泳需求。

本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小(8×10cm)PAGE凝胶,具体数量根据凝胶厚度决定:0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶,1mm厚度凝胶可以配制至少90块胶,1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。

● 运输和贮存:

本产品常温运输;组份按照标签温度贮存;有效期一年。

● 特点:

1. 方便:彩色上层胶,方便上样;上层胶和下层胶溶液1:1混合,无需计算;

2. 安全:不用接触有毒粉末;不用单独添加TEMED;

3. 兼容性广:制胶溶液中不含SDS,可用于非变性电泳(Native-PAGE);

● 使用说明:

  凝胶制备:

1.1参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

1.2 根据下表参考选择合适的凝胶浓度

表一不同浓度的PAGE下层胶的最佳分离范围

下层胶(分离胶)浓度

最佳分离范围

6%

50-350 kD

8%

35-300 kD

10%

20-150 kD

12%

15-100 kD

15%

10-80 kD










1.3 根据下表配制凝胶:

表二 凝胶配制表

下层胶配方

上层胶配方

胶厚度

下层胶溶液B

下层胶溶液A

改良型促凝剂

胶厚度

彩色上层胶溶液B

上层胶溶液A

改良型促凝剂

0.75 mm

2 ml

2 ml

40 μl

0.75 mm

0.5 ml

0.5 ml

10 μl

1.0 mm

2.5 ml

2.5 ml

50 μl

1.0 mm

0.75 ml

0.75 ml

15 μl

1.5 mm

4 ml

4 ml

80 μl

1.5 mm

1 ml

1 ml

20 μl

1.3.1 取等体积下层胶溶液B 和下层胶溶液A ,各 2.0/2.5/4.0 ml,混匀;

1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的改良型促凝剂,轻轻混匀,将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可;

注意:此溶液为过量,请勿全部注入。

1.3.3 沿玻璃板缓慢加入适量灭菌水或无水乙醇覆盖于下层胶之上,待下层胶凝固后,倒去上层水或乙醇;

注意:当水(乙醇)和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝固;25℃5-10分钟可以聚合。

1.3.4 取等体积彩色上层胶溶液B和上层胶溶液A ,各 0.5/0.75/1.0 ml,混匀;

1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的改良型促凝剂,轻轻混匀,插入梳齿;

1.3.6 待上层胶凝固后 (约20-40 min),拔去梳齿即可用于电泳。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。

上层胶25℃ 20-25分钟可以聚合;18℃ 35-40分钟可以聚合。

  电泳:

2.1 SDS-PAGE变性电泳:

2.1.1电泳缓冲液配制:

将5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉(自备,组份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris,0.5% SDS)全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

2.1.2 样品处理:融化-混合-变性-上样

5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀;将缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀,如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液;将蛋白样品置于95℃中加热5-10分钟;蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。

2.1.3 电泳过程;

在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,用1ml吸头彻底冲洗加样孔,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

表三 SDS-PAGE电泳条件

恒电压

起始电流(一板胶)

结束电流(一板胶)

电泳时间

适用条件

150V

35-40 mA

15-20 mA

55 + min

最佳电压,最优的分辨率

200V

45-55 mA

20-25 mA

45+ min

节省时间

225V

40-50 mA

15-20 mA

35+ min

250V

65-75 mA

20-25 mA

30+ min

300V

70-80 mA

25-35mA

25+ min

最省时间

2.2 非变性电泳(Native PAGE):

2.2.1电泳缓冲液配制:

将5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉(自备,组份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris)全部倒入1L烧杯中,加入约900 ml水彻底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。

2.2.2 样品处理:融化-混合-上样

5×非变性非还原蛋白上样缓冲液常温数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀;将缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀,如8 μl样品加入2 μl 5×上样缓冲液;蛋白样品加入凝胶加样孔内电泳。注:非变性电泳样品不能加热处理。

2.2.3 电泳过程;

在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,用1ml吸头彻底冲洗加样孔,随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

 

 

表四 Native PAGE电泳条件

 

恒电压

起始电流

结束电流

电泳时间

适用条件

推荐电压

150V

25-35/板胶

5-10 mA/板胶

60 + min

最佳电压,最优的分辨率

染色:

1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

2. 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。

3. 加入适量蒸馏水脱色,期间更换1-2次蒸馏水,摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。

4. 观察保存结果。


实验示例:


 
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