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2×CTAB提取缓冲液

2×CTAB提取缓冲液

产品编号:RTG2405-200ml

产品规格:200ml

相关规格:
数量
价格 ¥150

2×CTAB提取缓冲液

● 产品编号及规格:                                                Ver.740662

货号

名称

规格

贮存

RTG2405-200ml

2×CTAB提取缓冲液

200 ml

RT

还原剂

1 ml

RT

RTG2405-500ml

2×CTAB提取缓冲液

500 ml

RT

还原剂

1 ml

RT

● 产品介绍:

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入醇(乙醇或异丙醇)沉淀即可使核酸分离出来。

    2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v,55 mM)CTAB,100 mM Tris (pH 8.0),20 mM EDTA,1.4 MNaCl,,还原剂(随用随加) 。

● 储存、运输及效期:

   常温贮存;常温运输;有效期2年。

注:环境温度低于15℃时,溶液会有结晶,37℃彻底溶化后使用。

● 实验操作步骤:

DNA提取:

   1.1 2×即用型CTAB提取液配制:

按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。配好后65℃预热后备用。

1.2 材料研磨:

取0.2-0.5新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

1.3 样品裂解:

按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5 ml离心管中,立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴30分钟,间歇混匀。

注:提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml,否则后续纯化不能在一个离心管内完成;CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

1.4 离心去杂质:

14000 g 常温离心5分钟,转移上清至新的1.5 ml离心管中。

1.5去除RNA:

上清中加入1/100上清体积的RNaseA溶液(10 mg/ml)(货号:RN001),如500 μl上清中加如5 μl RNaseA溶液,37℃处理20分钟。

1.6 第一次纯化:

步骤1.5溶液中加入等体积的Tris酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g 离心10分钟,小心吸取上清到一干净1.5 ml离心管中,不要触及下层。

1.7 第二次纯化:

上清中加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g离心10分钟,保留上层水相。

1.8 沉淀DNA:

将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,-20℃静

置30分钟;14000 g4℃离心10分钟。

1.9 漂洗DNA:

1.9.1 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,414000 g 3分钟,吸弃乙醇。

1.9.2 4 14000 g 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。

1.10 贮存DNA:

加入50-100 μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA,-20保存备用。

RNA提取:

注:以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free

2.1 2×即用型CTAB提取液(RNase-free,现用现配)配制:

        2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC,如100 ml中加入100 μl DEPC,混匀后过夜处理,随后高温高压,即为2×即用型CTAB提取缓冲液(RNase-free)。按照终浓度1 % (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液(RNase-free)中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配,配好后65℃预热备用。

2.2 材料研磨:

取0.2-0.5新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

2.3 样品裂解:

按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5 ml离心管中,立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴30分钟,间歇混匀。

注:提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml,否则后续纯化不能在一个离心管内完成;CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

2.4 离心去杂质:

14000 g 常温离心5分钟,转移上清至新的1.5 ml离心管中。

2.5 第一次纯化:

上清中加入等体积的水酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g 离心10分钟。

2.6 第二次纯化:

将上清液转入另一1.5 ml离心管中,加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g离心10分钟。

2.7 沉淀RNA:

将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入1/2体积7.5 M LiCl溶液(RNase-free)(货号:LC1030),轻柔混匀,-20℃ 静置30分钟;14000 g4℃离心10分钟。

2.8 漂洗RNA:

2.8.1 去上清液, 沉淀中加入1ml 70%乙醇(RNase-free),吹打漂洗沉淀,14000 g4℃3分钟,吸弃乙醇。

2.8.2 14000 g4℃1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

注:RNA沉淀不能过分干燥,否则不好溶解。

2.9 贮存RNA:

加入50-100 μl的RNase-free水溶解RNA,-80保存备用。

使用该产品发表部分文章列表:

1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.

Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li

Journal: Foods. 2021, 10, 2610.

InstitutionHefei University of Technology

Paper linkhttps://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610

2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.

Author: YaqingXiao,PeijunLi

Journal: Food Research International. 2020.

InstitutionHefei University of Technology

Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247



 
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