15% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸变性电泳预制胶

● 产品介绍：

RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸变性电泳预制胶适用于 10-1000 个碱基长度的单链 DNA或 RNA的分析和纯化，可用于合成寡核苷酸分析和纯化、RNA 酶保护实验、体外转录研究和 RNA 印迹实验等。是一款安全、快捷、高性能的预制凝胶，即开即用无需自行配置各种试剂及灌胶操作，采用全自动化灌胶技术，大大降低批间差异。核酸条带均一性好，分辨率高。兼容市场上主流的 mini 电泳槽， 如 Bio-Rad，天能，六一和君意东方等。

产品参数：

预制胶板尺寸：长 9.8 cm，宽8.4 cm，厚度为4.1 mm

预制胶尺寸：长 8.1 cm，宽  7.4 cm，厚度为1.1 mm

梳孔：12 孔

包装规格：10板/盒

最大上样量：30 μl（12 孔）

● 产品货号及选择：

● 贮存、效期及运输：

    预制胶4-8℃贮存，切勿置于0oC以下冷冻；有效期30天；常温运输。

● 使用说明：

一. 样品准备：

1.1单链DNA样品加入等体积的2×TBE尿素上样缓冲液（用于尿素变性胶）（货号：DL080）；RNA样品加入等体积的2×RNA上样缓冲液 (尿素变性胶，RNase-free) （货号：RTE4103-05）；70℃孵育5分钟以充分变性核酸以打开核酸的二级结构，立即置于冰水浴中。 建议每孔上样0.2-0.5 μg左右即可。

1.2 TBE-尿素-PAGE电泳可以选择单链DNA Marker（25-75 nt）（货号：RTM501）或单链DNA Marker （15-120nt）（货号：RTM506）或单链DNA Marker（10-75 nt）预混型（货号：RTM 508）作为分子量标准。

二. 电泳液的准备：

取 5×TBE（货号：TB001），加入去离子水稀释为1×，制备成 1×TBE buffer。对于RNA样品电泳，取5×TBE（RNase-free）（货号：TB001F），加入RNase-free水/DEPC水（货号：RF001-02）稀释为 1×，制备成  1×TBE buffer。

1×TBE电泳缓冲液配制方法

三. 电泳：

3.1 将预制胶从包装袋中取出，装入兼容的电泳槽中，加入电泳缓冲液，再缓慢地将梳子拔出。

注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。

六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等电泳槽可以直接使用预制胶。不兼容Thermol系列电泳槽。

3.2内槽加满电泳液，外槽加入电泳液没过电泳槽底部的阳极即可，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。

3.3 上样：在梳孔内加入适当浓度和体积的样品。

注：最佳上样量须通过实验来确定，样品过量较易导致条带拖尾。

3.4 将电泳槽盖子盖好，并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红，黑对黑)。一般在150V电压，电泳50-90分钟，根据溴酚蓝的位置大体判断条带大小位置，停止电泳。

3.5 取出玻璃胶板，稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板，将凝胶取出。

四. 染色：

单链DNA或RNA样品可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）或核酸快速高灵敏度染色试剂盒（货号：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。注：如果使用核酸染料染色，RealSafe Red（货号：GR002）或RealSafe All（货号：GR004）核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。

以下程序用RealSafe Red核酸染料(货号:GR002)进行染色。

4.1  漂洗：拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3-5分钟。

4.2  染色液配制：

4.3 染色：

凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40-60 rpm  染色30 分钟。

4.4 观察：

紫外灯或蓝光仪上观察条带。

● 实验示例：