Long Taq DNA Polymerase

长片段DNA聚合酶

● 贮存

  -20℃保存一年。

● 产品简介

Long Taq DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成。两种酶协同作用实现了扩增效率、合成速度和延伸性能的完美统一，在长片段PCR反应中具有独特的优势，可以合成超长的DNA片段。另外，此酶具有比Taq DNA聚合酶约5倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。

● 产品组成（RTL3102-02）

Long Taq DNA Polymerase（5U/μl）              100μl

10×Long Taq PCR buffer（含Mg^2＋）              1ml

2×GC buffer                                    2×1 ml

产品组成（RTL3102-03）

Long Taq DNA Polymerase（5U/μl）              5×100μl

10×Long Taq PCR buffer（含Mg^2＋）              5×1ml

2×GC buffer                                    10×1 ml

● 活性定义

1单位(U) Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

● 酶贮存缓冲液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

● 适用范围

短链和长链DNA扩增，特别适合于长片段DNA的扩增。

● 使用说明：

1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

2. 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。

3. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。

4. PCR仪上执行以下程序：

三步法：

两步法：

*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。

● 使用举例：

以λ DNA为模板，配合10×Long Taq PCR buffer，可以很好扩增20kb DNA片段。

以水稻基因组做模板，配合10×Long Taq PCR buffer可以很好扩增PEPCase 5.2kb DNA片段。

●   常见问题：

Q1： Long Taq DNA polymerase能扩增多长片段？

A1：对简单模板（如λ噬菌体做模板），可以扩增20kb片段；对复杂模板（如基因组DNA），可以扩增8kb片段。

Q2：Long Taq DNA polymerase保真性怎样？

A2：Long Taq含有3’-5’校对活性的聚合酶，有校对功能。保真性为普通Taq酶的5倍。

Q3： Long Taq DNA polymerase是否只能扩增长片段？

A3：Long Taq也能很好的扩增低于5kb的片段，只是在长片段扩增中更有优势。

Q4：进行长片段PCR时，为什么推荐使用2阶段温度PCR法？

A4：长片段PCR扩增时要设计比较长的引物，以增加引物的特异性，而长引物的Tm比较高。在进行长片段PCR时，退火温度和延伸温度间的差距很小，当退火温度超过60℃时，退火温度和延伸温度可以设定为一个温度，一般为68℃，这样进行2阶段温度PCR，在长片段PCR中能得到更好的效果。

Q5：使用Long Taq DNA polymerase的扩增产物是否可以进行TA克隆？

A5：由于使用Long Taq得到的PCR产物大多数带有A，可以进行TA克隆。然而，如果想提高TA克隆的连接效率，建议加A后再进行TA克隆。

Q6：Long Taq DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗？

A6：要扩增高GC含量片段，建议使用Long Taq配合2×GC buffer使用；不建议使用10×Long Taq buffer。