琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
● 试剂盒内容:
试剂盒组成
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RTP2201-02 (100次)
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RTP2201-03(200次)
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溶胶液PN
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100 ml
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2×100
ml
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3 M NaAc pH5.2
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500μl
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500μl
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漂洗液PW
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25 ml
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2×25 ml
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洗脱缓冲液EB
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15 ml
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15 ml
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吸附柱CA1
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100个
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2×100个
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收集管(2 ml)
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100个
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2×100个
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说明书
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1份
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1份
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● 储存条件:
本试剂盒在室温(15–25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2–8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10-20分钟,以平衡溶液温度。)
● 产品简介:
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时去除蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp–40 kb大小的片段,回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30-50 %)。
每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为20
μg。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
● 产品特点:
1 溶胶液PN为亮黄色,便于观察胶是否彻底融化和溶胶体系的pH是否合适。
2 操作快捷,单个样品操作少于15分钟。
注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1 电泳时最好换用新鲜的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果;如有可能,尽量使用TAE系统,因为有研究指出使用TBE系统后,回收产物中的痕量硼酸会影响后续的酶切反应。
2 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤;请尽量去除不含目的片段的琼脂糖凝胶,这将会对融胶很有帮助。
3 第一次使用前请按照标签说明在漂洗液PW中加入无水乙醇,并做好标记,用完后紧拧瓶盖。
● 操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量。
2 向胶块中加入3倍体积溶胶液PN (如果凝胶重为100mg,其体积可视为100 μl,则加入300 μl溶胶液),55℃水浴放置10分钟,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。
注意:
① 如果此时溶胶液变为粉红色,请加入少量3MNaAc pH5.2(一般说来,10μl足矣),使溶胶液变为黄色再上柱离心。
② 对于高浓度的凝胶(>2%),按照100mg凝胶加入100μl灭菌水和600μl溶胶液PN的比例加入溶胶液PN。
③ 胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
3
可选步骤:当目的片段<500bp时,如想提高回收效率,向溶胶体系种加入1/3溶胶液PN体积的异丙醇(如使用300μl溶胶液,则加入100μl异丙醇),混匀,55℃温浴1分钟后再进行步骤4。当目的片段>500bp时,省略此步骤,直接进行步骤4。
4 将上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中(吸附柱放入收集管中),室温放置2分钟,13,000
rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。
注意:
1 吸附柱CA的有效容积为700μl,如溶胶体系体积大于700μl,分次上柱,保证全部溶液都加到吸附柱中。
2
<100bp和>10kb的片段请在室温放置10分钟,这将会提高回收效率。
5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13,000 rpm离心60秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。
6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW,13,000
rpm离心30-60秒,倒掉废液。
7 将离心吸附柱CA1放回收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液。
注意:此步必不可少!如果漂洗液有残留会影响回收效率和DNA质量,进而影响下游实验;离心后将吸附柱盖子打开,室温放置2分钟,这样将有助于彻底挥发残余乙醇。
8 将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB(一般不要少于30μl),室温放置2分钟。13,000 rpm离心1分钟收集DNA溶液。
注意:
1可将洗脱缓冲液EB预热到70℃后再加到吸附膜上,这样可以提高洗脱效率。
2 CA1柱的洗脱体积不应少于30
μl,体积过小将会降低回收效率。
3洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率
9 DNA产物-20℃保存。
RTP2201 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒发表文章
1. [2008 IF=1.749] Development of a sequence-characterized
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Author: J.H. Liu, L. Gao, T.G. Liu and W.Q. Chen
Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
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Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒
Journal: Phyton-International Journal of
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Institution:College of
Horticulture, Shanxi Agricultural University
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