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Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒(多肽变性电泳)

Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒(多肽变性电泳)

产品编号:RTD6122

产品规格:25次

相关规格:
数量
价格 ¥300


Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒(适用于多肽电泳)     说明书Ver 740056

 

货号

名称

规格

RTD6122

Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒

25

 

产品组成:

序号

组分货号

名称

规格

贮存

1

RTD6122-01

浓缩胶缓冲液

20 ml

4

2

RTD6122-02

分离胶缓冲液

65 ml

4

3

RTD6122-03

浓缩胶聚合溶液

20 ml

4

4

RTD6122-04

分离胶聚合溶液

65 ml

4

5

AP020P

10% APS(干粉)

5 ml

常温

配制后-20℃

6

TA0761-01

TEMED

0.5 ml

常温

7

CB010P

10×Tris-Tricine-SDS缓冲液

500 ml(干粉)

常温

配制后4℃

8

TP050-01

2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)

1 ml

-20

产品简介:

该产品含有多肽电泳全套试剂,可以用来检测2.5-20 kD的多肽大小。本试剂盒可配制至少25块常规大小(8×10cm),厚度1 mm的PAGE胶。该产品具有以下特点:

1 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离2.5-5 kD多肽;

2 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合浓缩胶或分离胶溶液,不用计算;

3 易于上样:红色浓缩胶,易于观察加样孔,上样方便。

贮存、运输及效期:

按照标签温度贮存;常温运输;有效期一年。

使用说明:

. 10%APS溶液配制:

10% APS为固体粉末,使用前加入5 ml双蒸水溶解即配制成10% APS溶液,将溶液分装后置于-20℃保存,通常一年内有效。该溶液在4℃条件下可以稳定保存两周。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的10% APS溶液。

. 制胶:

1. 配制分离胶:

1.1按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。                    表1 (一块1 mmmini胶用量)*

 

分离胶

浓缩胶

 

18T /5 ml

5T /1.5 ml

浓缩胶缓冲液

/

0.75 ml

分离胶缓冲液

2.5 ml

/

浓缩胶用聚合溶液

/

0.75 ml

分离胶用聚合溶液

2.5 ml

/

10%APS溶液

~50 μl

~15 μl

TEMED

~5 μl

1.5 μl

注: * 如非必须,不要使用厚度1.5 mm的凝胶,尽量使用厚度1 mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

1.2 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可。注:此溶液为过量,请勿全部注入。

1.3 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。

1.4 静置10-30分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。分离胶25℃条件下,约20分钟可以聚合。

2. 配制浓缩胶:

去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留的乙醇吸去。

2.1 按照表一将不同成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

2.2 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

2.3 静置30-50分钟待凝胶聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。浓缩胶25℃条件下,约40分钟可以聚合。

. 电泳:

3.1 变性电泳缓冲液和样品配制:

3.1.1 10×Tris-Tricine- SDS缓冲液配制:

将10×Tris-Tricine -SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine -SDS缓冲液。

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TTS缓冲液。

3.1.2 变性样品处理:

        待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)[Cat No:TP050]等体积混合,95处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液,根据说明书上样(预染Marker不能加热处理,非预染Marker上样前一般要95处理5分钟)。

3.2 变性电泳缓冲液配制和样品配制:

3.2.1 10×Tris-Tricine缓冲液配制:

将10×Tris-Tricine缓冲液(10×TT)粉末[Cat No:CB020P](试剂盒不提供)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500 ml 10×TT缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine缓冲液。

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TT缓冲液。

3.2.2 非变性样品处理:

      待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(非变性,非还原)[Cat No:TP070] (试剂盒不提供)等体积混合,不要加热,直接上样。

3.3 电泳:

将电泳槽的内槽加满电泳缓冲液,轻柔拔出梳子,用1 ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品加入点样孔,稳压电泳(表2),至蓝色考马斯亮蓝指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

2 多肽电泳条件

恒电压

150 V

起始电流

60-75 mA/板胶

结束电流

15-25 mA/板胶

电泳时间

2.5-3小时

注:稳压电泳,电流不用调节,记录电流数值在推荐范围内,电泳过程中电流会逐渐降低。

 

. 染色:

凝胶可以使用常规考马斯亮蓝染色液和脱色液进行染色和观察。需要注意的是,常规染色和脱色方法需要较长时间,小肽由于长度较短,和凝胶结合不紧密,长时间在溶液中浸泡容易从凝胶中脱离。常规染色和脱色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的FastBlue蛋白染色液(Cat No:RTD6202),该产品除具有染色快,无毒,灵敏性高等特点外,还能对小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。


 实验示例:


 
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