10% TBE-尿素-PAGE制胶液（核酸变性电泳）
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货号
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名称
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规格
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RTE4104-10
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10% TBE-尿素-PAGE制胶液(核酸变性电泳)
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200 ml
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● 产品组成：
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序号
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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1
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RTE4104-10-1
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10% TBE-尿素-PAGE制胶液
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200 ml
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4℃
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2
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AP020P
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APS（干粉）
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5 ml
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RT (配制后-20℃贮存)
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3
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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4
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说明书
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一份
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● 产品简介：
核酸尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸和小RNA电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸或RNA片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
本公司提供的TBE-尿素-PAGE制胶液为一瓶即用型试剂，包含尿素，凝胶聚合溶液和TBE缓冲液，使用时只需取适量制胶液，随后加入催化剂即可配制成固定浓度的TBE-尿素-PAGE凝胶，使用方便。
根据下表选择合适的凝胶浓度：
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推荐分离范围 nt
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TBE-尿素-PAGE浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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200-1000
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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50-400
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8%
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~19 nt
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~75 nt
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40-350
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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30-300
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12%
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~12 nt
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~55 nt
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10-150
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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8-120
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20%
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~5 nt
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~50 nt
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按照每次制备7 ml 凝胶（大小10×8cm，1mm厚度）计算，该制胶液可以至少制备25块20%TBE-尿素-PAGE凝胶。
如果进行RNA电泳实验，建议使用RNase-free水配制相关溶液，避免RNA的降解。
● 贮存和运输：
按照标签温度贮存；有效期6个月；试剂盒常温运输。
● 使用说明：
一、制备凝胶：
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml 灭菌水或RNase-free水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
1.1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
1.2．凝胶配制：将不同体积的成分混合。
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10%TBE-尿素-PAGE凝胶
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总体积7 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶
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10% TBE-尿素-PAGE制胶液
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7 ml
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10%APS
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50-70 μl
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TEMED
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5-7 μl
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1.3将配制好的胶液加入到玻璃板中，在胶的液面到达顶部时停止灌胶，插入梳子。
1.4 静置25-40 分钟。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。凝胶25℃ 20-25分钟可以聚合；18℃ 35-40分钟可以聚合。
二、电泳：
2.1. 预电泳（可选）：
拔出梳子，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。
注：1×TBE配方如下：
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终浓度
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顺序
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原料
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1升
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5 升
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89
mM
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1
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Tris碱 [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2
mM
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2
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EDTA
2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89
MM
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3
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硼酸 [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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蒸馏水或RNase-free水最后定容至
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1 升
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5 升
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最后pH在8.2-8.3之间，可以不用调节pH，记录每批pH
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2.2. 取 3-5
μl样品，加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液（货号：DL080），70℃处理5分钟后立即冰浴，上样。
2.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200V
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15-20
mA/板胶
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8-15
mA/板胶
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50+
min
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最佳电压，最优的分辨率
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2.4. 根据下表溴酚蓝指示前沿位置判断条带位置，取出凝胶进行后续实验。
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变性胶浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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8%
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~19 nt
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~75 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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12%
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~12 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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20%
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~5 nt
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~50 nt
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三、染色（RealSafe核酸染料染色）：
3.1染色液配制：取一合适的塑料容器，加入100 ml 1×TBE，随后加入10 μl RealSafe核酸染料（货号：GR002）混匀。
3.2 染色：取下凝胶放入染色液中，常温下摇床轻轻地摇动凝胶染色，最佳的染胶时间为15-20 分钟，这取决于凝胶的厚度、聚丙烯酰胺的浓度和核酸的长短。凝胶越厚或聚丙烯酰胺的浓度越高，染色所需要的时间就越长。注：染色溶液至少可重复使用2-3次。如果不立即再用的话，建议将用过的染色溶液冷藏避光保存。
3.3 观察：紫外灯下观察条带。
● 实验示例：