单链DNA Marker（10-75 nt）预混型
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货号
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名称
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规格
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RTM508
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单链DNA Marker（10-75 nt）预混型
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25次
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● 产品编号及规格：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTM508-01
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单链DNA Marker（10-75 nt）预混型
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25次（125 μl）
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上样缓冲液
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1 ml
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4℃或-20℃
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● 产品简介：
单链DNA Marker由不同长度的单链DNA分子混合而成，9条带的大小为10，15，20，25，30，35，40，50，75
nt。35
nt 浓度约为100
ng/μl，其余条带浓度约为50
ng/μl。该产品已经含有上样缓冲液，使用前70度处理5分钟后可以直接上样。该Marker适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102），核酸快速高灵敏度染色试剂盒（Cat：RTS5101）或核酸染料如RealSafe
Red（货号：GR002）或RealSafe
All（货号：GR004）均可以得到清晰的条带分离效果。
产品内附带2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080-01），方便待检样品的上样。以每次上样5 μl计算，该产品可以使用大约25次。
● 贮存、运输及效期：
按照标签温度贮存；湿冰运输，有效期2年。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。
一. 凝胶制备：
1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制胶：
表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)
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单链DNA长度
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最佳凝胶浓度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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补水到总体积
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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5-120 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5
ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.2在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.3静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1.4去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)
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各组份体积（ml）
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凝胶浓度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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灭菌水
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.2 ml
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补水至体积2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.6静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二. 样品制备：
2.1
取适量体积单链DNA
Marker样品（不用添加上样缓冲液）；待测样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080-01）混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。
三.电泳：
3.1. 预电泳（可选）：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。
3.2.上样：根据梳齿确定Marker上样量， 一般是10齿1mm厚梳子上样5
μl，15齿1mm厚梳子上样3
μl。
3.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200 V
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15-20 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60+ min
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最佳电压，最优的分辨率
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3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
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变性胶浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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8%
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~19 nt
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~75 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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20%
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~8 nt
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~35 nt
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四．染色：
用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102）或核酸快速高灵敏度染色试剂盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。注：如果使用核酸染料染色，RealSafe Red（货号：GR002）或RealSafe All（货号：GR004）核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 注意事项：
1. 单链DNA Marker产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。
● 电泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）染色：
15%尿素变性胶分离单链DNA
lane 1-9 为10，15，20，25，30，35，40，50，75 nt ssDNA 上样量为0.5
μg
lane 10：RTM501，单链DNA
Marker（20-75
nt）预混型，上样量5
μl
lane 11：RTM507，单链DNA
Marker（20-75
nt）非预混型，配制后上样量5
μl
lane 12：RTM508，单链DNA
Marker（10-75
nt）预混型，上样量5
μl
电泳条件：1×TBE，恒压200 V 50 min
染色：RealSafe Red后染20min，紫外激发
使用RTM501 单链DNA
Marker（20-75 nt）发表部分文章列表：
1. [2021 IF=3.532] Real-time detection of
SARS-CoV-2 in clinical samples via ultrafast ligation-dependent RNA transcription
amplification
Marker :RTM501，单链DNA Marker（20-75
nt）
Author: Peng
Zhang, Yang Li, Dongmei Zhang, Xinghao Zhu, Jinling Guo, Cuiping Ma and Chao
Shi
Journal: Analytical Methods 2023,
15,1915
Institution： Qingdao University
Paper
link：https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2023/AY/D3AY00093A